第43回日本未熟児新生児学会抄録

Partial Liqud Ventilation の基礎的検討
―perflubronの細胞毒性に関する検討（第２報）―

長野県立こども病院新生児科１）
小諸厚生総合病院小児科２）
○山崎崇志１）２）、岩田欧介１）、松沢重行１）
中村友彦１）、杉浦正俊１）、田村正徳１）
株式会社八光電機製作所技術部生化学研究課：滝沢実

緒言
 我々は先の第34回日本新生児学会において、海外ですでにPartial Liquid Ventilationにおいて臨床応用されているperflubron（LiquiVentＴＭ）について、コロニー形成法による細胞毒性試験を行った結果を報告した。今回は、ＭＴＴ法を用いてperflubronの細胞増殖性試験を行った結果を報告する。

方法
 ①ヒトの肺扁平上皮癌由来であるＳＱ－５細胞を継代培養し、増殖を安定させる。②コラ－ゲン溶液と培養液（ＭＥＭ＋10％ＦＢＳ）でコラ－ゲンゲルを作り、２４穴マイクロプレート内に600μｌずつ分注する。③作成されたコラーゲンゲル上に１Wellあたり1000個の細胞をそれぞれ植え込み、ゲル上に細胞を付着させる。④培養液を吸引除去し、培養液、perflubron、FluorinertTM、（FC-84）、リン酸緩衝液（PBS）、シリコーンオイル（KF-96TM）を１mlずつ加え、perflubron の蒸発を防ぐためプレート上を密封する。⑤ｲﾝｷｭﾍﾞ-ﾀ-で３，６，９日間培養した後、プレート内のゲル上の液をすべて吸引除去し、ＭＴＴ試薬入りの培養液を1mlずつ加え、さらに４時間培養する。⑥培養後ＭＴＴ試薬入り培養液を吸引除去し、ＰＢＳで洗った後、0.04N HCl含有イソプロパノールを１mlずつ注入し、出来た色素（ﾌｫﾙﾏｻﾞﾝ）を抽出する。⑦色素抽出液を別のマイクロプレートに移し、マイクロプレートリーダー（波長570nm）でそれぞれの吸光度を測定する。この吸光度は細胞増殖性を反映するものと考え、比較してみた。

結果
 perflubron及びコントロールの吸光度を比較したところ、有意差を認めなかった。したがって、perflubronを添加した細胞の増殖性はコントロールと差がないと考えられた。

結語
 コロニー形成法による細胞毒性試験のみならず、ＭＴＴ法を用いた細胞増殖性試験でもperflubronの生体への安全性が高いことが証明された。