研究／発表　第34回日本新生児学会抄録

第34回日本新生児学会抄録

Partial Liqud Ventilation の基礎的検討
―perflubronの細胞毒性に関する検討―

長野県立こども病院新生児科^１）
小諸厚生総合病院小児科^２）
○山崎崇志^１）２）、古庄知己^１）、五石圭司^１）、
岩田欧介^１）、松沢重行^１）、笹野拓也^１）、
中村友彦^１）、杉浦正俊^１）、田村正徳^{１）

株式会社八光電機製作所技術部生化学研究課：滝沢実}

緒言	我々はすでにPartial Liquid Ventilation（以下ＰＬＶ）の動物実験に用いていたFluorinert^TM８４について、ハムスタ－の肺癌由来細胞であるＶ７９およびヒトの肺癌由来細胞のＳＱ－５を用いて細胞毒性試験を行い、細胞毒性がないことを証明してきた。今回は海外においてＰＬＶですでに臨床応用されているperflubron（LiquiVent^ＴＭ）について同様の細胞毒性試験を行ったので報告する。
方法	①Ｖ７９（またはＳＱ－５）を継代培養する。②対数増殖期にある細胞を0.2％トリプシンで剥がし計数する。③必要枚数用意した60mmﾃﾞｨｯｼｭ内にコラ－ゲン溶液と培養液（ＭＥＭ＋10％ＦＢＳ）でコラ－ゲンゲルを作る。④ﾃﾞｨｯｼｭに100個の細胞をそれぞれ植え込み、ゲル上に細胞を付着させる。⑤培養液を吸引除去した後、perflubronを原液のまま加え、perflubron の蒸発を防ぐためﾃﾞｨｯｼｭの蓋を密封した後、37ﾟ､5%ＣＯ２のｲﾝｷｭﾍﾞ-ﾀ-で10日間培養する。⑥培養後出来たコロニ－を数える。perflubron の代わりに培養液のみ加えたものをコントロ－ルとして比較した。またｼﾘｺ-ﾝｵｲﾙ（ﾎﾟﾘｼﾞﾒﾁﾙｼﾛｷｻﾝ）を加えた実験も行い比較してみた。
結果	perflubron及び培養液を加えたもののコロニ－数を比較したところ、細胞生存率に有意差を認めなかった。しかし、コロニ－をよく見ると、コントロ－ルでは細胞が密集しているのに対し、perflubron を加えたものでは細胞が分散している印象があった。ｼﾘｺ-ﾝｵｲﾙでは細胞生存率にコントロールと有意差を認め、コロニ－の細胞は分散している傾向があった。
考察	ハムスタ－肺癌細胞由来のＶ７９およびヒト肺癌細胞由来のＳＱ－５を用いてperflubronの細胞毒性が無いことを証明した。しかし、perflubronを加えたものではコロニ－の細胞が分散している傾向があり、 perflubronの比重が大きいため物理的な影響を受けていることが考えられたが、perflubronが疎水性であることが関係している可能性も考えられた。
結語	ハムスタ－肺癌細胞由来のＶ７９およびヒト肺癌細胞由来のＳＱ－５を用いて細胞毒性が無いことが証明され、perflubronの生体への安全性が高いことが証明された。コロニーを形成する細胞形態については現在検討中である。